Commentaire coloration de gram

Trois Partis:Préparer le diaporamaExécution de la coloration de GramL'Examen de la Résultat

La coloration de Gram est Une procédure rapide utilisé versez Rechercher la présence de bactéries Dans des échantillons de tissus et de caractériser les bactéries Gram positif à Gram négatif à UO, en Fonction des Propriétés chimiques et physiques de Leurs Parois Cellulaires. La coloration de Gram Doit Presque Toujours Être fait en Tant que première étape de diagnostic dans le D'une Bactéries infection de dé.


La coloration de Gram est Nomme d'après le scientifique danois Hans Christian Gram (1853 - 1938), Qui a la technique mise au point de de en 1882 et publié en 1884 Comme technique de juin de Distinguer Entre deux types de bactéries aux Cliniques Symptômes similaires: Streptococcus pneumoniae (Également Connu sous le Pneumocoque) et Klebsiella pneumoniae bactéries.

Partie 1 de 3: Préparation de la diapositive
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Preparez-vous versez les travaux de laboratoire. METTEZ des gants et Attacher les cheveux aspirer Verser eviter de contaminer les bactéries Échantillon Que vous Serez Testez. Désinfecter l'ONU espace de travail sous la hotte, OU DANS UN autre endroit bien aéré. Vérifiez Que Le brûleur Bunsen et d'ONU microscope sont Fonctionnels avant de COMMENCER.
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Stérilisateur Une lame de microscope en verre. Si la vente de verre est boiteux, le laver à l'eau savonneuse Verser enlever la graisse et la Saleté. Désinfectez la lame Avec de l'éthanol, nettoyant vitres versez, ous ne importe quel méthode recommandée par Votre laboratoire est.
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Ajouter L'Échantillon à la diapositive. Vous pouvez UTILISER la méthode de coloration de Gram versez secouriste à identifier les bactéries PRESENTES Dans des échantillons Médicaux, des cultures bactériennes cultivées UO Dans Une boîte de Pétri. Pour la coloration de Gram Pour Etre utile, ajouter des Nations Unies hacher couche de L'Échantillon sur la tache. Un echantillon sous 24 heures HNE Recommandé vieux, voiture les bactéries PEUVENT AINSI âges Ont endommagé Parois Cellulaires Qui répondent Moins prévisible à la coloration de Gram.
  • Si l'UTILISER sur non Échantillon de tissu, ajouter 1 à 2 gouttes sur la lame de verre. Etalez-le uniformément sur la lame Verser ancien frottis non hachée, en Utilisant le bord D'une seconde lame de verre stérilisé. Laissez Sécher à l'air avant de continuateur.
  • Si vous Prenez des bactéries à partir D'une boîte de Pétri, stériliser Une boucle d'inoculation Arboisien flamme du brûleur Bunsen JUSQU'A Ce qu'il se allume, laisser refroidir PUIS. Utilisez-le Verser placers Une goutte d'eau stérile sur la diapositive, PUIS stériliser et refroidir à nouveau la boucle avant de Transférer Un petit Échantillon de bactéries et en agitant doucement DANS L'EAU.
  • Les bactéries Dans bouillon non doivent Être Mélanges Dans vortex non, Ajoute Avec Une boucle d'inoculation comme ci-Dessus de PUIS, sans ajouter de l'eau Supplémentaire.
  • Si vous avez frottis non, rouler l'écouvillon légérement sur la diapositive.
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Chaleur fixateur le frottis. La chaleur va fixer les bactéries à la diapositive, de Sorte Qu'ils ne sont également pas FACILEMENT rincé pendant la tache. Adopter RAPIDEMENT la diapositive de Deux à trois Fois à Travers Une flamme du brûleur Bunsen Ou chauffeur au-Dessus D'une lame de réchauffeur électrique. Ne pas surchauffer, ous les échantillons peut etre Deformes. Si vous utilisez brûleur Bunsen non, la flamme devrait Être Un petit cône bleu, PAS UN juin d'Orange de hauteur.
  • Alternativement, le frottis peut être Fixé le méthanol à la lieu en ajoutant 1-2 gouttes de méthanol sur le frottis séché, égouttoir l'excès de méthanol, et en permettant à l'air sec. Ce procedé minimiseur les DOMMAGES à des Cellules hôtes, Ce Qui Donne non propre fond.


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    PlaceZ la lame Sur un plateau de coloration. Un plateau de coloration est métallique de l'ONU, en verre en plastique ous plat peu profond Avec Une petite maille ous fil conducteur de Soutien Qui traverse le haut. Placer la lame sur le Dessus de Soutien de la CE, de Sorte Que les Liquides Que vous utiliserez PEUVENT égouttoir vers le bas Dans le bac.
  • Si vous ne Avez PAS UN plateau de coloration, la lame peut être Placé Directement sur le Dessus D'UN bac à glaçons en plastique.
  • Partie 2 de 3: Exécution de la coloration de Gram
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    Recouvrir le frottis Avec du cristal violette. UTILISER Une pipette Verser inonder les échantillons De Bactéries avec plusieurs gouttes de colorant cristal violet, Parfois Appelés violette de gentiane. ATTENDEZ trente à soixante secondes. Le cristal violet (CV) SOI dissocie des solutions aqueuses Dans DANS LE CV + et chlorure d'ions (Cl-). CES ions penetrer A travers la paroi cellulaire et la membrane Cellulaire des Deux Cellules Gram-POSITIFS ET négatifs Gram. Le CV + ions interagit Avec des Composants chargés négativement de Cellules bactériennes versez colorer les Cellules pourpre.
  • De Nombreux laboratoires utilisent le cristal violet "de Hucker", Qui Ajoute l'oxalate d'ammonium Verser eviter la précipitation.
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    Rincez le cristal violette doucement. Inclinez la lame et UTILISER Une bouteille de lavage versez faire gicler Un petit ruisseau d'eau distillée ous Tapez sur le Dessus de la diapositive. L'eau devrait couler sur la surface du frottis de de de Mais pas Viser Directement. Ne pas rincer excessivement, Ce Qui Pourrait enlever la tache de Gram positif bactéries.
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    Recouvrir le frottis Avec de l'iode, PUIS rincer. UTILISER pipetage Une Verser couvrir le frottis Avec de l'iode. Laisser pendentif Maison Repos Au Moins 60 secondes, PUIS rincer avec la même méthode prudente de. L'iode, sous la Forme négativement Chargés d'ions, interagit Avec CV + Verser Ancien de Grands des complexes de Cristal violette et iode (complexes CV-i) Dans les canapés Internes et Externes de la cellule. Cette Volonté piège en couleur cristal violette pourpre Dans la cellule, partout Où il a taché.
    • L'iode est corrosif. Eviter l'inhalation, l'ingestion de contacts d'UO Avec la peau.
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    Ajouter decoloriser non, PUIS rincer RAPIDEMENT. Un mélange 1: 1 d'acétone et d'éthanol est utilisé généralement versez cette étape critique, Qui Doit Être soigneusement chronomètre. Maintenez la lame à l'angle de l'ONU, PUIS ajouter le decoloriser JUSQU'A CE qu'aucune couleur violette, plus est visible DANS LES eaux de ruissellement de drainage. Cela Prend généralement Moins de 10 secondes, OU encore Moins de Temps si le decoloriser Contient des AINSI Que de concentrations de l'acétone. Arrêtez Immédiatement Ou l'decoloriser va enlever la tache de cristal violette à partir de Deux Cellules Gram-négatifs et POSITIFS, et la tache Devra Être répétée. Immédiatement rincer l'excès decoloriser, en Utilisant la technique anterieure.
  • Pur (+ 95%) de l'acétone peut être utilisé à La Place. De plus IL ya de l'acétone, AINSI Que la decoloriser travaillera, la synchronisation de juin necessitant AINSI précis.
  • Si vous rencontrez des Problèmes de synchronisation de cette étape, Pensez à ajouter la chute de decoloriser à goutte.
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    Recouvrir le frottis de contraste, PUIS rincer. Une contre-coloration, typiquement safranine fuchsine ous, est utilisé versez Ajouter DU CONTRASTE Supplémentaire Entre les Bactéries gram-négatifs ET Gram-POSITIFS, par coloration de bactéries décolorée (Gram négatif) de couleur rose rouge ous. Laissez agir pendant 45 secondes au moins, PUIS rincer.
  • Fuchsin tache de bactéries gram-négatifs Nombreuses, plus intensément, Comme Haemophilus spp Et Puis Legionella spp. Rendre l'Option de Meilleure de juin CELA peut Verser les débutants.
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    Séchez la diapositive. Vous pouvez permettre à la lame Sécher à l'air, ous séchez en Utilisant du papier absorbant vendu non TEC effet. La coloration de Gram est Terminée.

    Partie 3 de 3: Examen du Résultat
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    Préparer le microscope optique. Placer la lame sous le microscope optique. Les bactéries Varient considérablement en taille, de Sorte Que Le grossissement totale Requis VARIERA d'400x à 1000x. A grossissements l'Extrémité Supérieure de CES, Une lentille d'objectif à immersion DANS L'EST lignes huile recommandée de lignes, plus de clarté Verser. Deposer Une goutte d'huile d'immersion sur la diapositive, en évitant le mouvement pendant l'APPLICATION Verser eviter les bulles. Déplacez la tourelle du microscope de Sorte Que la lentille de l'Objectif soi enclenche, Touchant l'huile.
  • Immersion DANS L'huile peut être utilisé sur les lentilles ne specialement conçus, non pas Objectif "à sec".
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    La grammaire de identifiant des Bactéries Gram-POSITIFS ET. Examinez la lame sous le microscope optique. Gram positif apparaissent pourpre, en raison Au cristal piégés de violette épaisses de Dans de Leurs Parois Cellulaires. Gram négatif AUGMENTE apparaissent rouge ous, Puisque la violette Lavé A travers les Parois Cellulaires hachis, Alors la contre-coloration rose, entra en Eux.
    • Si L'Échantillon est trop epaisse, vous pouvez voir des resultats POSITIFS Faussement. types de colorer Un Nouvel Echantillon SI TOUS LES bactéries Gram positif DE sont, versez soi assureur Que Le Résultat est CORRECTE.
    • Si le decoloriser couru Trop longtemps, vous pouvez voir des resultats négatifs Faussement. Colorer types Un Nouvel Echantillon SI TOUS LES De Bactéries Gram négatif Sont, de doubleur vérifier Vos Résultats.
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    Regardez des images de référence. Si Vous n'êtes pas certain de Qui est bactérie Une, regarder à Travers Une collection d'images de référence, triées par la forme et le Résultat de la coloration de Gram. Vous pouvez TROUVER des Bases de données en ligne sur le BASE DE DONNEES nationale des Pathogènes microbiens, Les bactéries de la la la la DANS Photos, Sites et De Nombreux Autres. Verser faciliter l'identification, exemples Courants ou diagnostique Dessous de Sont par le statut de programme et La clichés des cours Important.
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    Identifier les Bactéries Gram-POSITIFS Par la forme. Les bactéries Sont en outre classés PAR Leur forme au microscope, Le plus gentiment en Tant que coques Barres (sphérique) de Ou (Cylindriques). VOICI QUELQUES Bactéries (violettes colorées) Gram Positif communie par la forme:
  • Cocci Gram à de Positif Sont généralement Soit Staphylocoques (Les coques de Ce Qui en grappes) OU Streptocoques (Ce Qui Dans Les coques de chaines).
  • bâtonnets Gram positif INCLURE Bacille, Clostridium, Corynebacterium, Et Puis Listeria. Actinomyces spp. Tiges Ont Souvent des branches Ou des filaments.
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    Identifier des Bactéries Gram-négatifs. (Bactéries colorées en rose) Gram négatif SONT SOUVENT classés en Trois Groupes. Cocci Sont des bactéries sphériques, longues tiges de bactéries Sont, mâche, Et Les Tiges sont coccoides Quelque part Entre les deux.
  • Les coques de Gram Sont Le plus gentiment Neisseria spp.
  • bâtonnets à Gram négatif INCLURE E. coli, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, Serratia, Proteus, Salmonella, Shigella, Pseudomonas, et bien d'Autres. Vibrio cholerae Peut Tiges de apparaitre ordinaires Ou des tiges Courbes.
  • bacilles Gram-négatifs "coccoides" (ou "coccobacilles») INCLURE Bordetella, Brucella, Haemophilus, Et Puis Pasteurella.
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    Evaluer des resultats mitigés. CERTAINES bactéries sont Difficiles à teindre Avec précision, en raison de la fragilité ous cireux de Leurs Parois Cellulaires. ILS PEUVENT Avoir un mélange de taches pourpres ous roses Dans la même cellule, ous Entre les differentes Cellules Dans la même frottis. Les bactéries 24 heures vieux PEUVENT Avoir CE Problème de Échantillon, Mais CERTAINES Espèces sont Difficiles à colorer à tout âge. ILS PEUVENT exiger des Essais AINSI Spécialisés Verser Affiner l'identification, Comme une tache acido-résistants, l'observation de la culture de la Croissance de la, cultures Moyennes IST, des Tests Génétiques OÜ.
  • Actinomyces, Arthobacter, Corynebacterium, Mycobacterium, Et Puis Propionibacterium spp. Sont Toutes Les Bactéries gram-positives envisagées, Mais apparaissent les colorées Souvent de.
  • Petits et mâche bactéries Telles Québec Treponema, Chlamydia, Et Puis Rickettsia spp. Sont Difficiles à la coloration de Gram correctement.
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    Eliminer les matières. procédures d '«' élimination des Déchets variante de la Entre les laboratoires et SELON LES Matériaux Utilise. Typiquement, le liquide Dans le bac de coloration est broyeur Dans des bouteilles scellées déchets dangereux Comme. Faire tremper les lames Dans Une solution d'eau de Javel à 10%, PUIS les jeter Dans des conteneurs Verser Objets Tranchants.




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